一、概述：

程控定量封口機是由智能電路電驅(qū)動，內(nèi)部加熱輥，專門用于51孔定量盤和 97 孔定量盤封膜作用，配合微生物檢測試劑使用，提供簡單、快速、準(zhǔn)確的定量檢測總大腸菌群、大腸埃希氏菌、糞（耐熱）大腸菌群、腸球菌和綠膿假單胞菌的實驗方案；51 孔定量盤和 97 孔定量盤是基于傳統(tǒng)方法Z大可能數(shù) (MPN) 統(tǒng)計模型而設(shè)計的半自動定量方法，可定量檢測出水樣結(jié)果，這種方法可以替代并優(yōu)于傳統(tǒng)（濾膜、及多管發(fā)酵）方法檢測水中微生物。

二、適用范圍:

用于水樣中的綠膿假單胞菌群、腸球菌、總大腸菌群和糞大腸桿菌、大腸埃希菌、菌落總數(shù)的快速檢測、可野外攜帶、應(yīng)急、定量檢測。

三、產(chǎn)品描述：

酶底物法檢測裝置由程控定量封口機、51 或 97 孔定量檢測盤、100mL定量瓶、酶底物法檢測試劑四部分組成，檢測水樣范圍:飲用水、源水、瓶裝水、中水、二次供水、管網(wǎng)水、廢水、食品水、畜牧用水、醫(yī)療用水等。

四、優(yōu)勢特點：

酶底物法為 GB5750-2006 及HJ1001-2018收錄的用于大腸桿菌檢測標(biāo)準(zhǔn)方法，酶底物法是目前水中大腸桿菌檢測的方法，目前以其方便快捷，假陽性低，適用大量樣品快速檢測等優(yōu)點正逐步被國內(nèi)檢測部門所認(rèn)可。

相對于多管發(fā)酵和濾膜法，酶底物法檢測步驟大大減少，而且對實驗環(huán)境要求不高，檢測時間可減少到 24 小時，在日常水樣監(jiān)測及應(yīng)急監(jiān)測中具有很好的應(yīng)用前景，可及時檢測，預(yù)防，減少重大公共安全事故的發(fā)生幾率。 以GB5750-2006 中總大腸菌群測定為例，比較三種方法，如表所示。

五、方法優(yōu)勢：

1.無需在無菌室內(nèi)操作。

2.手工操作時間小于 1 分鐘。

3.無需培養(yǎng)基制備和大量玻璃器皿滅菌。

4.24小時即可完成定性定量分析，無需驗證試驗。

用于GB5750-2006，HJ1001-2018固定底物技術(shù)（DST）酶底物法的MMO-MUG培養(yǎng)基配套使用程控定量封口機，檢測水樣用（51孔定量盤）或（97孔定量盤）封裝。

六、技術(shù)參數(shù)

七、51孔和97定量盤操作說明

51孔和97孔定量盤滅菌消毒

定量盤與DST酶底物法配合使用，定量檢測100ml水中微生物，將DST-酶底物法試劑與檢測水樣混合后加入到51孔或者97孔定量盤中，使用程控定量封口機封膜，根據(jù)檢測不同項目的培養(yǎng)溫度和時間進行培養(yǎng)（24H），數(shù)出顯陽性的孔格，對照MPN表讀結(jié)果。

【工作原理】

加入含有總大腸菌群細菌的水樣，目標(biāo)細菌在Minimal Medium ONPG-MUG培養(yǎng)基中36℃±1℃培養(yǎng)，總大腸菌群細菌產(chǎn)生的特異性生物酶β一半乳糖苷酶能分解Minimal Medium ONPG-MUG培養(yǎng)基中的色源底物ONPG,使培養(yǎng)呈現(xiàn)黃色；同時水樣中大腸埃希氏菌產(chǎn)生特異性的β一葡萄糖醛酸酶分解Minimal Medium ONPG-MUG培養(yǎng)基中的熒光底物MUG，產(chǎn)生特征性熒光。同樣原理，耐熱大腸菌群(糞大腸菌群)在44.5℃培養(yǎng)時會分解Minimal Medium ONPG-MUG培養(yǎng)基中的色源底物ONPG，使培養(yǎng)基呈現(xiàn)黃色。

【使用方法】

①定性測試：

在100ml水樣中加入試劑，溶解，36℃±1℃培養(yǎng)24h；

結(jié)果判讀

無色=陰性

黃色=總大腸菌群陽性

黃色+熒光=大腸埃希氏菌群陽性

注：耐熱大腸群菌（糞大腸菌群）需44.5℃培養(yǎng)24h后，觀察黃色為陽性

②定量檢測

在100ml水樣中加入試劑，溶解；

倒入51孔定量檢測盤（定量孔板）或97孔定量檢測盤（定量孔板）中；

用程控定量封口機對定量檢測盤（定量孔板）進行封膜，36 ℃±1℃培養(yǎng)24h；

定量檢測盤（定量孔板）結(jié)果判讀：

無色=陰性

黃色格子=總大腸菌群陽性

黃色+熒光格子=大腸埃希氏菌群陽性

查對照MPN表計數(shù)

注：耐熱大腸群菌（糞大腸菌群）需44.5℃培養(yǎng)24h后，觀察黃色格子為陽性結(jié)果，查對照MPN表計數(shù)。